Płytki krwi i mikrotubule: WPŁYW COLCHICINE I D2O NA PLATELET AGGREGATION I UWOLNIENIE INDUKOWANE JONOFOREM WAPNIOWYM A23187

Badaliśmy rolę mikrotubul w agregacji płytek i wydzielaniu (reakcja uwalniania) indukowanej przez jonofor wapnia A23187 (0,8-5? M). W tych stężeniach agregacja płytek poprzedzona była okresem opóźnienia wynoszącym? 1 min. Wykazano, że kolchicyna (środek, który zakłóca montaż i demontaż mikrotubuli) wiąże się z mikrotubulami płytek krwi, stosując [3H] kolchicynę w stężeniu, które jest specyficzne dla mikrotubul w innych tkankach (10 nM). Kolchicyna wydłużyła okres opóźnienia, zahamowała drugorzędową falę agregacji płytek krwi i zahamowała reakcję uwalniania (uwalnianie [14C] serotoniny). Płytki następnie inkubowano z 20-60% D2O, środkiem, który stabilizuje mikrotubule. D2O pokonało wywołane przez kolchicynę hamowanie okresu opóźnienia, agregacji i uwalniania. Sam D2O wzmocnił agregację płytek o 59 14 14% (SEM) i skrócił okres opóźnienia o 43 10 10%. Wnioskujemy, że funkcjonujące mikrotubule są wymagane do agregacji i uwalniania płytek krwi oraz że mikrotubule preparatów płytek krwi działają submaximally.Images

Tłumienie ostrych i przewlekłych stanów zapalnych u szczurów z nowotworem.

Zarówno ostre jak i przewlekłe komórkowe reakcje zapalne zostały zahamowane u szczurów z nowotworami złośliwymi. Zahamowanie ostrych reakcji zapalnych wykazano w zapaleniu naczyń wywołanym przez kompleks immunologiczny oraz w akumulacji leukocytów w podskórnie wszczepionych gąbkach poliwinylowych. U pacjentów z przewlekłą reakcją zapalną wykazano supresję reakcji nadwrażliwości typu opóźnionego. Pomimo tych stłumionych reakcji, reaktywność skórna dla mediatorów wazoprzepuszczalności nie została zmniejszona. Ani poziomy dopełniacza w surowicy, ani liczba krążących leukocytów nie uległy depresji u zwierząt z guzami. Do supresji reakcji zapalnych towarzyszył ubytek leukotaktyczny, w którym uczestniczyły zarówno neutrofile, jak i monocyty. Defekt ten można przypisać nieprawidłowości w surowicy, które sprawiają, że oba typy komórek leukotaktycznie są wadliwe.

Przepuszczalność kłębuszkowa makromolekuł. Wpływ konfiguracji molekularnej na frakcyjny klirens nienaładowanego dekstranu i obojętnej peroksydazy chrzanu u szczurów.

Parametry molekularne inne niż rozmiar i ładunek prawdopodobnie wpłyną na filtrację makrocząsteczek przez filtr kłębuszkowy. Mamy więc badania nad przepuszczalnością makrocząsteczek kłębuszków o bardzo różnych konfiguracjach molekularnych, takich jak peroksydaza chrzanowa, glikoproteina roślinna z punktem izoelektrycznym w fizjologicznym zakresie pH oraz dekstran, nienaładowany polimer cukrowy D-glukopiranozy. Równoczesne luzy częściowe określono dla obu badanych makromolekuł u pięciu szczurów Wistar-Furth. Wyniki wskazują, że dla promienia molekularnego 28,45 A, mierzonego metodą filtracji żelowej, polimer cukrowy ma klirens frakcyjny wynoszący średnio 0,483, przekraczający wartość wskaźnika białkowego, o wartości 0,068, mniejszy niż 7 Wnioskujemy, że inne parametry molekularne, takie jak kształt, elastyczność i odkształcalność, odgrywają ważną rolę w transporcie makrocząsteczek przez macierz zewnątrzkomórkową, która stanowi filtr kłębuszkowy.

Wykazanie obecności kwasu tuberkulostearynowego w plwocinie pacjentów z gruźlicą płuc przez monitorowanie wybranych jonów.

Wybrane monitorowanie jonów zastosowano do wykrycia kwasu tuberkulostearynowego (kwasu 10-metyloktadekanowego) w plwocinie pacjentów z gruźlicą płuc. Próbki autoklawowano, liofilizowano, ekstrahowano i metanolizowano przed poddaniem chromatografii cienkowarstwowej i wstrzyknięto do chromatografu gazowego / spektrometru masowego. Kwas tuberkulostearynowy można było wykryć w pięciu z sześciu próbek prątków gruźlicy zawierających szybkie pręciki wykrywalne za pomocą mikroskopii świetlnej barwionych barwników Ziehl-Neelsena. Po tym jak próbki plwociny były hodowane przez pięć dni na pożywce Löwenstein-Jensen, gdy jeszcze nie zaobserwowano wizualnie kolonii, obecność kwasu tuberkulostearynowego wykazano we wszystkich sześciu przypadkach gruźlicy. W odpowiednich analizach plwociny od ośmiu pacjentów z nienowotworowym zapaleniem płuc, nie znaleziono kwasu tuberkulostearynowego. Ten kwas tłuszczowy, którego obecność wykazano również w kulturach różnych gatunków mykobakterii i nocardium, jest charakterystyczny dla organizmów z rzędu Actinomycetales. Demonstracja kwasu tuberkulostearynowego w próbkach plwociny może stanowić szybki i czuły sposób diagnozowania gruźlicy płuc.

Modyfikacja właściwości biofizycznych i endotoksycznych bakteryjnych lipopolisacharydów przez surowicę.

Normalna surowica królika zmniejsza gęstość wyporową lipopolisacharydu (LPS) z Escherichia coli 0111: B4 (d = 1.44 g / cm3) i Salmonella minnesota R595 (d = 1,38 g / cm3) do wartości mniejszej niż g / cm3. To przesunięcie gęstości jest związane z hamowaniem szeregu aktywności endotoksycznych LPS; mianowicie aktywność pirogenna, zdolność do natychmiastowej neutropenii u królików, letalność u myszy z adrenalektomią i aktywność przeciwpełniotwórczą. Po podaniu dożylnym LPS królikom zaobserwowano jakościowo podobną zmianę gęstości w płynie. Wstępne dowody sugerują, że przesunięcie gęstości nie występuje w wyniku degradacji szkieletu glikolipidowego LPS. Dane te sugerują, że interakcje LPS z komponentami w osoczu (lub surowicy) prowadzące do zmniejszenia gęstości w płynie mogą stanowić główny szlak detoksykacji LPS.

Promowanie ludzkiej replikacji prekursorów adipocytów przez 17-beta-estradiol w hodowli.

Badano wpływ 17-beta-estradiolu i 17-alfa-estradiolu na prekursory adipocytów dorosłego człowieka rosnącego w systemie hodowli komórkowej. Komórki hodowano w subkulturze w obecności lub nieobecności hormonu. 17?-estradiol spowodował znaczącą promocję replikacji prekursorów adipocytów, co określono na podstawie zliczania komórek i wbudowania radioaktywnej tymidyny do DNA. Pobudzenie komórek stymulowane hormonem w zakresie stężeń 0,5-500 ng / ml pożywki wzrostowej. Najwyższy badany poziom wynosił 500 ng / ml. Maksymalne efekty uzyskano przy 50 ng / ml (P mniejsze niż 0,001 w teście na parze t, 48 godzin po dodaniu hormonu). Wszystkie 10 szczepów komórkowych (pięć pochodziło od mężczyzn i pięć od kobiet), które były testowane reagowało podobnie do hormonu. 17?-estradiol nie wpływał na wielkość komórki. 17?-estradiol nie sprzyjał replikacji prekursorów adipocytów, ani nie wpływał na wielkość komórki. W ten sposób 17-beta-estradiol, który jest aktywnym izomerem w znanych tkankach docelowych, stymuluje namnażanie się ludzkich prekursorów adipocytów w kulturze.

Moczowe wydzielanie peptydów elastynowych zawierających desmozynę po wstrzyknięciu do wewnątrzracryplowym elastazy u chomików

Wstrzyknięcie do tchawicy elastazy trzustkowej powoduje ostrą utratę elastyny z płuc chomików i rozwój rozedmy płuc. Do pomiaru ilości elastyny wykorzystaliśmy pomiary unikalnych kowalencyjnych, krzyżujących się aminokwasów z elastyny, desmozyny i izodesmozyny. Bezpośrednie pomiary na płucach oszacowały średnią utratę elastyny o 57% po iniekcji elastazy. Produkty rozpadu elastyny oznaczono również ilościowo w moczu i kale po wstrzyknięciu. Średnio 8,8 nmola desmozyny odzyskano z moczu każdego chomika. Ta ilość reprezentowała desmozyny z 61% elastyny utraconej z płuc. Desmozyna i izodesmozyna występowały w moczu we frakcjach peptydowych, które wahały się od 9 do 27 000 daltonów, średnio 13 000. Jedynie śladowe ilości desmosyn można było wykryć w kale. Desmozyny wstrzyknięte dootrzewnowo zostały całkowicie odzyskane z moczem, a badania radioaktywnych znaczników nie ujawniły katabolizmu in vivo wstrzykniętych desmosyn. Wyniki te sugerują, że pomiar desmosyn w moczu jest obiecujący w badaniu obrotu elastyną.

Generowanie trombiny i wydzielanie czynnika płytkowego 4 podczas krzepnięcia krwi.

Badaliśmy reakcję uwalniania płytek krwi i wytwarzanie trombiny podczas spontanicznego krzepnięcia krwi pełnej in vitro. Zarówno tworzenie się trombiny, jak i wydzielanie czynnika płytkowego 4 wykryto co najmniej 12 minut przed krzepnięciem (czas krzepnięcia, 22-26 minut). Początkowo przy niskich stężeniach trombiny (2- 5 ng / ml) obserwuje się niewielki wzrost czynnika 4 płytek krwi (mniej niż 1% ilości obecnej w surowicy). Następnie następuje stopniowy wzrost zarówno czynnika 4 w czynniku płytkowym, jak i stężenia trombiny w okresie 12 do 20 minut. Na koniec, 5 min 5 przed krzepnięciem, następuje szybkie zwiększenie wytwarzania trombiny i wydzielania płytek krwi. W związku z tym wykazaliśmy, że uwalnianie czynnika płytkowego 4 jest przedłużoną reakcją i to, w jakim stopniu występuje równoległe wytwarzanie trombiny. Dopiero gdy stężenie trombiny jest wysokie (45-90) ng / ml) – w okresie tworzenia się skrzepu – występuje większa część wydzielania czynnika płytkowego 4. Uwalnianie czynnika płytkowego 4, takiego jak tworzenie fibryny, występuje w ostatnim etapie koagulacji in vitro.

Synteza antygenu czynnika VIII przez hodowlane megakariocyty świnki morskiej

Immunoprecypitaty zawierające antygen czynnika VIII świnki zostały przygotowane z osocza świnki morskiej z reagującym krzyżowo króliczym antyludzkim czynnikiem VIII. Monospecyficzne antysurowice dla świnki morskiej Antygen czynnika VIII wytworzono u królików, stosując te przemyte immunoprecypitaty jako immunogeny. Powstały antysurowice na antygen czynnika VIII świnki morskiej wykrył antygen czynnika VIII w osoczu świnki morskiej i zahamował aktywność czynnika von Willebranda w osoczu świnki morskiej. To przeciwciało wykrywa również antygen czynnika VIII w rozpuszczonej mieszaninie białek przygotowanej z izolowanych hodowanych megakariocytów świnki morskiej. Hodowane megakariocyty świnki morskiej znakowano radioaktywną leucyną. Według radiografii radioaktywnej 96,9% aktywności radioaktywnej było obecne w megakariocytach. Radioaktywny antygen czynnika VIII obecny w mieszaninie solubilizowanego białka komórkowego został wyizolowany metodą immunoprecypitacji i charakteryzowany przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu. Wyniki pokazują, że hodowlane megakariocyty świnki morskiej syntetyzują antygen czynnika VIII, który zawiera tę samą podjednostkę polipeptydową (ciężar cząsteczkowy 200000) obecny w antygenie czynnika VIII w osoczu świnki morskiej.

Izolacja i funkcjonalna charakterystyka ludzkich limfocytów limfoidalnych błony śluzowej człowieka.

Żywe zawiesiny ludzkich limfoidalnych komórek śluzówki okrężnicy przygotowano przez kolejne traktowanie tkanki ditiotreitolem, EDTA w roztworach soli wolnej od wapnia i magnezu i oczyszczoną kolagenazę. Populacja limfocytów jelitowych, w porównaniu do populacji krwi obwodowej, miała większą liczbę komórek pochodzących ze szpiku kostnego, w szczególności komórek zawierających błonową IgA; wykazał spontaniczne skojarzenie z makrofagami; uległy szybkiemu tworzeniu się rozetek z erytrocytami owcy; i wykazali zwiększoną syntezę immunoglobulin in vitro. Wszystkie komórki pochodzące z grasicy były równe w dwóch populacjach. Zmniejszenia stwierdzono w "zerowej" liczbie komórek, w komórkach niosących błonowe IgD i IgM oraz w odpowiedzi na fitohemaglutyninę. Makrofagi / monocyty w populacji jelita miały zwiększoną wielkość, ziarnistość, ruchliwość, utrzymujące się przyleganie do szkła i aktywność fagocytarną. Wydaje się, że ludzkie jelitowe komórki limfoidalne stanowią populację komórek, która jest bardziej "dojrzała" i / lub "aktywowana" w porównaniu z komórkami limfoidalnymi krwi obwodowej. Metoda przygotowania powinna nadawać się do badań nad nieswoistymi zapaleniami jelit, rakiem żołądka i jelit oraz układem immunologicznym wydzielania jelitowego.