Wątrobowy metabolizm glukagonu. Korelacja przetwarzania hormonów przez wyizolowane hepatocyty psów z metabolizmem glukagonu u ludzi iu psów.

Stwierdziliśmy, że hepatocyty psie i szczurze przetwarzają (125I) jododec10-glukagon na metabolit peptydowy pozbawiony końcowych trzech NH2 hormonu. Peptyd jest uwalniany do pożywki do inkubacji komórek, a na jego tworzenie nie ma wpływu wiele środków lizosotropowych lub innych. Wykorzystanie specyficznych testów radioimmunologicznych i filtracja żelowa wykazały zarówno u zdrowych pacjentów, jak iu pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek, peptyd osoczowy posiadający właściwości fragmentu hormonalnego zidentyfikowanego na podstawie badań komórkowych. Badania nad psem wykazały dodatni gradient fragmentu w wątrobie i brak różnicowego gradientu fragmentu i glukagonu przez nerki. Wnioskujemy, że fragment glukagonu powstaje w wyniku mediowanego komórkowo przetwarzania hormonu na powierzchownym aspekcie hepatocytów, fragment glukagonu zidentyfikowany podczas eksperymentów in vitro reprezentuje pokrewny peptyd powstały podczas wątrobowego metabolizmu glukagonu in vivo i pomiar fragmentu za pomocą radioimmunologicznych oznaczeń terminali COOH może prowadzić do niedostatecznej ekstrakcji wątrobowego glukagonu.

Wpływ różnych postaci transferyny na ekspresję receptora transferyny, pobieranie żelaza i komórkową proliferację ludzkich białaczkowych komórek HL60. Mechanizmy odpowiedzialne za swoistą cytotoksyczność transferryny-galu.

Wcześniej wykazaliśmy, że ludzkie komórki białaczkowe rozmnażają się normalnie w pożywce bez surowicy zawierającej różne formy transferyny, ale dodatek transferryny-galu prowadzi do hamowania proliferacji komórkowej. Ponieważ gal ma potencjał terapeutyczny, zbadano wpływ transferryny-galu na proliferację białaczki, ekspresję receptora transferyny i wykorzystanie żelaza w komórkach. Cytotoksyczność galu jest znacznie zwiększona przez jego wiązanie z transferyną, a cytotoksyczność może zostać odwrócona przez transferrynę-żelazo, ale nie przez inne formy transferyny. Ekspozycja na transferrynę-gal prowadzi do znacznego wzrostu miejsc wiązania transferyny na powierzchni komórki, ale mimo to, włączenie do komórki 59Fe jest niewłaściwie niskie. Chociaż nie wykluczono przetaczania transferyny-galu do innego przedziału komórkowego, inne badania sugerują, że transferryna-gal wpływa na wewnątrzkomórkowe uwalnianie 59Fe z transferyny przez zakłócanie procesów odpowiedzialnych za wewnątrzkomórkowe zakwaszenie. Te badania, razem wzięte, pokazują, że hamowanie włączenia komórkowego żelaza przez transferrynę-gal jest warunkiem wstępnym hamowania proliferacji komórkowej.

Translacyjne profile kwasów rybonukleinowych przekaźników alfa 1, alfa 2 i beta-globiny w ludzkich retikulocytach.

W ludzkich retikulocytach krytyczne zrównoważenie syntezy alfa- i beta-globiny może być kontrolowane częściowo przez różnicową translację trzech głównych dorosłych matrycowych RNA (mRNA), alfa 1, alfa 2 i beta. W tym badaniu ustaliliśmy, jako parametr wydajności translacyjnej, względne obciążenie rybosomów tych trzech mRNA. Stosując sondy oligonukleotydowe specyficzne dla mRNA alfa- 1 i alfa 2-globiny, stwierdziliśmy, że te dwa mRNA mają identyczne profile translacyjne. Ich dystrybucja kontrastuje z mRNA beta-globiny, który jest obecny na cięższych polibosomach i jest mniej rozpowszechniony we frakcjach rybonukleoproteinowych pre-80S. Względna dystrybucja mRNA alfa-beta-globiny jest zgodna z bardziej wydajnym tłumaczeniem beta-globiny. Przeciwnie, równoległe rozkłady mRNA alfa 1 i alfa 2-globiny sugerują, że są one translowane z równą wydajnością. Biorąc pod uwagę względne stężenia dwóch mRNA alfa-globiny w prawidłowych retikulocytach, wynik ten przewiduje dominującą rolę locus alfa-globiny w ekspresji ludzkiej alfa-globiny.

Hamowanie przez ludzką trombomodulinę wywołaną przez czynnik Xa cięcie protrombiny.

Ludzka trombomodulina znacząco hamowała szybkość przekształcania protrombiny w trombinę przez czynnik Xa w obecności fosfolipidu lub płytek krwi, wapnia i czynnika Va. Elektroforeza siarczanu sodu w żelu poliakryloamidowym dodecylosiarczanu aktywacji protrombiny 125I ujawniła, że trombomodulina zmniejszała szybkość aktywacji protrombiny, ale nie zmienia schematu dekoltu. Hamowanie zostało odwrócone przez włączenie wysoce swoistego króliczego przeciwciała antytrombomoduliny. W przypadku zastąpienia trombomoduliny przez hirudynę, tempo wytwarzania trombiny nie zmniejszyło się, wyłączając możliwość, że hamowanie przez trombomodulinę było wtórne w stosunku do wiązania małych ilości trombiny utworzonej we wczesnej fazie reakcji i zapobieganie uszkodzeniom zwrotnym protrombiny przez trombinę. Hamująca aktywność trombomoduliny została przezwyciężona poprzez zwiększenie stężenia czynnika Xa i wykazano specyficzne, nasycalne wiązanie trombomoduliny z czynnikiem Xa. Wyniki te wskazują, że trombomodulina wiąże się z czynnikiem Xa, a tym samym hamuje aktywność kompleksu protrombinazy.

Rekombinowana interleukina 2 i interferon gamma działają synergistycznie na różnych etapach końcowego dojrzewania ludzkich komórek B in vitro.

Zbadano wpływ rekombinowanej interleukiny 2 (IL-2) na różnicowanie in vitro ludzkich migdałkowych komórek B, które nie były wstępnie inkubowane ze Staphylococcus aureus Cowan I lub z anty-ludzką IgM. Wykazano, że IL-2 indukuje wytwarzanie komórek zawierających Ig w sposób zależny od dawki od 2,5 do 2500 U IL-2 / ml. Odwrotnie, ilości Ig wydzielane w supernatancie hodowli stwierdzono w większości eksperymentów do piku przy 25 U / ml. Zbadano możliwą obecność w hodowlach stymulowanych IL-2 komórek zdolnych do syntezy Ig, ale nie wydzielających Ig, które wytworzyli. Spośród wielu przetestowanych czynników odkryliśmy, że interferon gamma, który nie wyzwalał różnicowania komórek B in vitro, gdy jest stosowany samodzielnie, może indukować zwiększone wydzielanie Ig bez zauważalnej zmiany liczby komórek zawierających Ig w hodowlach stymulowanych IL. -2. Przypuszcza się, że gamma-interferon i IL-2 wpływają na kolejne etapy różnicowania komórek B in vitro.

Hybrydomy wytwarzające autoprzeciwciało anty-DNA normalnego ludzkiego pochodzenia limfocytowego.

Fuzja linii komórkowej ludzkiego szpiczaka GM 4672 i migdałkowych komórek migdałkowych od zdrowego dawcy dała 13 pierwotnych hybrydom, które wytworzyły przeciwciała przeciwko jednoniciowemu DNA (ssDNA) IgM, jak określono w oznaczeniu immunoenzymatycznym. Dziewięć z tych pierwotnych hybrydom zostało sklonowanych i uzyskano w sumie 34 klony. Supernatanty tych sklonowanych hybrydom testowano pod kątem wiązania do ssDNA, natywnego DNA, RNA, supernatantowego DNA o niskiej masie cząsteczkowej, poli (polioksybuananylu) – poli (oksydopirydyny), soli sodowej polioksyetylacji tymidylu i kardiolipiny. Supernatanty ze wszystkich klonów, ale jeden wykazywał polispecyficzność podczas reakcji z badanymi antygenami. To, że klony były prawdziwymi hybrydomami zamiast transformowanymi komórkami limfoidalnymi, było dowodem na wydzielanie przeciwciał IgM anty-DNA, analizę kariotypu i typowanie HLA. Badania te sugerują, że geny immunoglobulin kodujące autoprzeciwciała anty-DNA z widmem swoistości kwasów nukleinowych podobnych do układowego tocznia rumieniowatego, istnieją wśród prawidłowych limfocytów B.

Transport bengalu różanego z udziałem albuminy za pośrednictwem perfundowanej wątroby szczura. Kinetyka reakcji na powierzchni komórki.

Szybka dysocjacja anionów organicznych z albuminy osocza maksymalizuje prezentację wolnego liganda na powierzchni komórki, a tym samym sprzyja jego wydajnej ekstrakcji w wątrobie. Nawet przyjmując te optymalne warunki, taurocholaty i różany bengal mają jednak frakcje ekstrakcji wątrobowej, które są wyższe niż można przypisać spontanicznej dysocjacji ich kompleksów albumin-ligand. W tym badaniu opracowaliśmy model transportu, który przypisuje to zachowanie do miejsc na błonie komórkowej hepatocytów, które wiążą kompleksy albumin-ligand, promując transport liganda do hepatocytów. Dopasowanie tego modelu do tempa usuwania bengalu róży mierzonego w szerokim zakresie stężeń albuminy daje szacunkową liczbę miejsc na powierzchni komórek i ich powinowactwo do albuminy. Te oszacowania są w dobrej zgodności z danymi zgłoszonymi przez Weisigera, Gollana i Ocknera dla wiązania albuminy wolnej od ligandu w izolowanych hepatocytach. Wnioskujemy, że oba eksperymenty mierzą to samo zjawisko i, odpowiednio, że wiązanie albuminy z powierzchnią komórki jest funkcjonalnym odpowiednikiem transportu za pośrednictwem albumin.

Albumina pomaga w usuwaniu taurocholanu przez wątrobę szczura.

Perfuzja wątroby szczura usuwa 97% taurocholanu z krążenia aferentnego, gdy stężenie albuminy perfuzatowej wynosi 0,5 g / dl. Zwiększenie stężenia albuminy 10-krotnie zmniejsza stężenie wolnego taurocholanu o współczynnik pięciu, ale powoduje jedynie 50% zmniejszenie pozornego współczynnika wychwytu. Podobna rozbieżność wynika z niezależnej od modelu analizy frakcji ekstrakcyjnych. Z tych obserwacji wynika, że wychwyt nie jest napędzany wyłącznie, lub nawet głównie, przez stężenie wolnego taurocholanu w osoczu, ale zależy również od interakcji między albuminą a powierzchnią komórki. Brak wiązania więzłości, kinetyka nasycenia i niejednorodna populacja komórek wątroby są uważane za alternatywne wyjaśnienia i wykluczone. Możliwość, że albumina wywiera swój wpływ poprzez zwiększenie dyfuzji taurocholanu przez nieprzezroczystą warstwę w przestrzeni Disse, wydaje się nieprawdopodobna, ale nie można jej wyeliminować.

Hemoliza mysich erytrocytów przez feripsrotoporfirynę IX i chlorochinę. Implikacje chemioterapeutyczne.

Inkubacja 0,5% zawiesiny przemytych normalnych erytrocytów myszy feroksrotoporfiryną IX (FP) przez 2,5 godziny w 37 ° C i pH 7,4 powoduje wystarczające uszkodzenie błony w celu wywołania hemolizy. Po sigmoidalnej krzywej dawka-odpowiedź następuje 50% hemolizy wytwarzanej przez 4 mikroM FP. Całkowita hemoliza jest wytwarzana przez 6 mikroM FP. Proces hemolityczny składa się z co najmniej dwóch faz: fazy opóźnienia około 45 minut, podczas której występuje niewielka hemoliza, oraz fazy charakteryzującej się szybką hemolizą. Chlorochina, która wiąże się ściśle z FP, wzmacnia efekt FP poprzez eliminację fazy opóźnienia. W warunkach tych eksperymentów maksymalne wzmocnienie obserwuje się przy stężeniach chlorochiny w zakresie 5-25 mikroM. Ponieważ FP powstaje, gdy pasożyty malarii trawią hemoglobinę, może pośredniczyć w chemioterapeutycznym działaniu chlorochiny, tworząc kompleks z lekiem, który może zwiększyć toksyczność FP dla błon biologicznych, w tym pasożyta.

Dowody na reaktywność z przeciwciałami hybrydoma na prawdopodobne mieloidalne pochodzenie komórek krwi obwodowej aktywnych w naturalnej cytotoksyczności i cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał.

Limfocyty z receptorami Fc (FcR) dla IgG aktywnych w naturalnej cytotoksyczności i cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciał rozdzielono na rozetkę erytrocytów owcy (E +) i frakcje nieokonujące (E-), i badano pod kątem reaktywności z panelem OK przeciwciał monoklonalnych wytwarzanych przez hybrydomy . Niewiele komórek we frakcji E + FcR + lub E-FcR + reagowało z siedmioma przeciwciałami stosowanymi do definiowania limfocytów T w różnych stadiach różnicowania (OK3, OKT4, OKT5, OKT6, OKT8, OKT9, OKT10). Żadna z frakcji nie eksprymowała antygenu podobnego do Ia (wykrywanego przez OKI1), ale oba były wysoce reaktywne wobec OKM1, przeciwciała, które reaguje z monocytami i granulocytami. Inkubacja tych cytotoksycznych komórek efektorowych za pomocą OKM1 z dodatkiem dopełniacza zniosła wszystkie reaktywności cytotoksyczne, ale inkubacja z przeciwciałem limfocytów T (OKT3) plus dopełniaczem nie miała znaczącego wpływu. Komórki te nie były prekursorami monocytów, ponieważ nie można było ich zaindukować in vitro w celu uzyskania właściwości makrofagów. Dane wskazują, że większość cytotoksycznych komórek efektorowych w naturalnej cytotoksyczności i cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciał nie znajduje się w linii komórek T, ale ma mieloidalne pochodzenie.